1981年12月27日，吳敏菲出生于上海的一個普通家庭，是家中獨女 。她從小就調皮得像個男孩子，而且是個有愛心、愛管閑事的“假小子”，因為好管閑事在小學五年級的時候還差點失明 。少女時期，她則進入上海謝晉恒通明星學校就讀 。

1998年，吳敏菲出演了個人首部電視劇《上海之戀》，由此開始演藝生涯 。2001年，參演古裝懸疑劇《無敵縣令》，飾演腹黑又毒辣的姜雨珊；同年，她還在現代反黑劇《絕不回頭》中飾演了男主角林龍麒的妹妹琦琦。

2002年，與于波、楊俊毅合作主演青春偶像劇《水晶之戀》，飾演心高氣傲、熱情奔放的大學生梅寶；同年，出演了個人首部劇情片《花眼》 。

2004年5月17日，參演的古裝神話喜劇《喜氣洋洋豬八戒》播出，飾演第二單元 《情迷女兒國》中的女兒國國王金枝玉葉 ；同年，她還在青春偶像劇《紫藤戀》中客串了女律師陳律霏。

2005年3月16日，出席愛情電影《桃花燦爛》在北京師范大學舉行的首映啟動儀式，吳敏菲在影片中飾演男主陸粞有精神疾病的妻子沈小妹 ；5月，主演的古裝傳奇劇《褡褳王爺》拍攝完成，飾演調皮又愛鬧事的丫頭“小橘子” ；隨后，主演的都市情感劇《下一站是幸?！凡コ觯椦蒺B(yǎng)女雷蕾，與王姬飾演的雷雅心演繹了一段感天動地的母女真情 ；同年，與鮑國安合作主演的諜戰(zhàn)劇《如此多嬌》播出，飾演內心善良、為了完成任務連父親都不敢認的共產黨員趙小年，這是她首次出演個性溫和而內斂的人物 。

2006年，與王學兵、童蕾合作主演都市情感劇《秘密》，飾演性格活潑的小明星林曉薇 ；4月26日，發(fā)布單曲《稻草人》 。2007年，主演武俠系列電影《鏢行天下》，飾演家世敗落的權貴小姐沈飛燕 。

《滇西1944》朱瑩瑩

2009年6月，在劇情電影《暴雨將至》中與李子雄合作，飾演一對熱心腸的父女 ；8月，主演的軍旅勵志劇《今生欠你一個擁抱》播出，在劇中飾演善良無私的軍嫂林曉敏 ；同年，與霍思燕、馮紹峰合作主演的家庭倫理劇《夫妻一場》播出，飾演敢愛敢恨的女記者梅琳 ；此外，她還參演了賀歲喜劇電影《財神到》，飾演一位精神病人 。

《天堂隔壁是瘋人院》小強

2011年1月，在抗日諜戰(zhàn)劇《戰(zhàn)火太陽山》中出演女教師錢蘭一角，與王思懿、吳健等合作演繹了地下工作者在抗日戰(zhàn)爭期間的諜戰(zhàn)傳奇 ；4月，主演涉案劇《無悔英雄》，飾演有男孩性格、上進、有責任感的刑偵女警 ；7月，與侯勇二次合作主演海峽兩岸親情劇《兄弟海》，飾演命運坎坷的傳統(tǒng)女性秀蘭 ；7月15日，吳敏菲還獲得了“優(yōu)酷影視盛典夏季盤點”的“新銳演員獎" ；9月，為趙燕國彰執(zhí)導的電影《正·青春》獻唱主題曲《知了叫春》 。

2012年7月28日，與于曉光、楊爍合作主演的抗戰(zhàn)劇《一門三司令》在湖北經視首播，飾演身份復雜的女情報員耿娟 ；12月8日，主演的抗戰(zhàn)動作劇《利箭行動》播出，在劇中飾演英姿颯爽的諜戰(zhàn)女特工肖嫣 。

2013年1月14日，參演的古裝劇《隋唐演義》播出，飾演風塵三俠之一、李靖的夫人紅拂女 ；2月，做客訪談節(jié)目《星夢奇媛》，講述她熒幕下的甜蜜生活；4月23日，出演的古裝愛情傳奇劇《英雄》播出，飾演勾踐的異母妹妹明月公主。

2014年4月22日，吳敏菲領銜主演的新媒體電影《超能美少女》在老舍茶館舉行了開拍儀式 ；4月28日，主演的抗戰(zhàn)劇《一個人戰(zhàn)爭》播出，在劇中飾演共產黨員蘭芝（后化名艾如歌） ；11月，與王琳、俞灝明、劉雨欣等合作主演家庭倫理愛情劇《多少愛可以重來》，吳敏菲出演事業(yè)有成、直言要做丁克的職場女強人林曉倩 。

2015年1月31日，參演的都市輕喜劇《我們家的微幸福生活》在中央電視臺電視劇頻道首播，飾演飯館主廚王文竹。2016年1月，主演的公益性質舞臺劇《予青春》在“向文藝范看7”盛典活動中首演，吳敏菲與趙燕國彰扮演一對夫妻 。2017年，出演都市刑偵劇《天下無詐》，與《重案六組》的演員們在同一部劇中再次“合體”，飾演女騙子劉春梅 。

2020年12月21日，特別出演的民國懸疑推理劇《拆·案》在愛奇藝播出，飾演病入膏肓的呂夫人和假扮呂夫人的杜若凝 。2021年11月16日，參演的都市情感劇《不惑之旅》播出，飾演因愛生恨的林婉柔。

2002年8月，吳敏菲與歌手樸樹在一個朋友的生日舞會上認識；之后，二人開始交往。2005年1月5日，她與樸樹在北京舉行了婚禮 。2015年，與好友莊曉君聯(lián)手創(chuàng)立了設計師品牌。

吳敏菲是一個非常正能量的姑娘，為人樂觀有才華。（瀟湘晨報評 ）她的性格率真、直白且簡單，不管是面對生活還是面對感情都真誠而無加任何修飾。在面對工作時，她展現出嚴謹、果斷且干練的面貌，如同一位擁有氣場的“女王”。而在面對朋友時，她又是真誠、直爽、不拘小節(jié)的形象。（騰訊娛樂評 ）在電視劇《一門三司令》中，她那既有南方女子的秀氣端莊，亦有著北方女孩的豪爽大方的性格，把聰慧可巧的“耿娟”一角詮釋得淋漓盡致。（孫波導演評 ）